在中國影視圈，馬伊琍是個很有個性的演員。儘管她在生活中遇到過不順，但她活得很真實，就像她演戲一樣，也特色鮮明。

1976年6月29日，馬伊琍出生於上海市虹口區。15歲時，馬伊琍參加上海電視臺的綜藝舞蹈隊，正式自食其力自己賺取學費。1993年，馬伊琍被選中主演電影《劉海粟》，那是她的第一次觸電經歷，收穫800元片酬。

1994年，馬伊琍考入上海戲劇學院94級表演系本科。1996年，馬伊琍與保劍峰、陳龍、高曙光、張雅琳共同出演了電視劇《真空愛情記錄》，講述了一群大學畢業生為了工作和愛情奮鬥的故事。

1998年，馬伊琍畢業於上海戲劇學院，畢業後參演了第一部改編自陝西駐滬作家李春平同名小說的電影《玻璃是透明的》，飾演“小丫子”。同年，其出演了第一部古裝電影《孔乙己》。

2000年，通過出演《黑洞》提升了表演事業。同年，在電視劇《前世今生》中飾演美貌且氣質超凡的秦婉瑩。2001年，出演電視劇《白天睡覺的女人》中的李秀。同年，在電影《西施眼》中飾演施雨，該片在2002年美國夏威夷國際電影節中獲評審團大將及亞洲最佳電影。2002年，因出演電視劇《還珠格格Ⅲ之天上人間》中的紫薇一角而被大眾所熟知。

馬伊琍憑藉於1996年出演的電視劇《真空愛情記錄》而正式出道。其後在2007年出演電視劇《奮鬥》，獲得巨大關注。此後片約不斷，演技受到廣泛認可，屢獲國內影視大獎。2020年12月28日，憑藉《旗袍美探》獲第29屆華鼎獎中國近現代題材電視劇最佳女演員獎。2018年1月1日，憑藉《我的前半生》獲得2017國劇盛典年度實力劇星獎。[7]1月31日，“2017中國慈善名人榜TOP30”揭曉，馬伊琍位居第二十二名。2月，馬伊琍出任電影《金錢世界》中國推廣大使。6月16日，憑《我的前半生》獲第24屆上海電視節白玉蘭獎最佳女主角。6月16日，參加第21屆上海國際電影節開幕式。7月14日，參加綜藝節目《朗讀者》。8月15日，獲得第29屆中國電視金鷹獎觀眾喜愛的女演員獎提名。]9月3日，參演的電影《那些女人》在中國內地上映。9月10日，發行合唱單曲《為你》。9月14日，主演的電影《未擇之路》上映。10月5日，與姚晨共同主演的電影《找到你》上映。12月，憑藉《進京城》獲得第10屆澳門國際電影節最佳女主角獎提名。

2019年4月26日，憑藉《找到你》獲第十屆中國導演協會2018年度表彰大會年度女演員獎。5月10日，參演的電影《進京城》上映，在劇中飾演鳳格格。6月12日，憑藉《找到你》獲第25屆華鼎獎中國電影最佳女主角獎。9月12日，參演的電影《拿摩一等》在中國內地上映。9月22日，主演的電視劇《在遠方》在浙江衛視播出，在劇中飾演路曉鷗。9月25日，發行單曲《相遇的可能》。9月30日，主演的電影《我和我的祖國》在中國內地上映。10月22日，憑藉電影《找到你》獲第32屆中國電影金雞獎最佳女主角提名。12月，參演電影《歐巴，你好帥》。

2020年4月，參演電視劇《在不安的世界安靜地活》。7月17日，憑藉《在遠方》獲第26屆上海電視節白玉蘭獎最佳女主角提名。8月26日，參加的綜藝節目《女人30+》第二季定檔在騰訊影片播出。8月28日，主演的電視劇《旗袍美探》定檔在騰訊影片、北京衛視播出，在劇中飾演蘇雯麗。12月28日，憑藉《旗袍美探》獲第29屆華鼎獎中國近現代題材電視劇最佳女演員獎。