在中國影視圈,馬伊琍是個很有個性的演員。儘管她在生活中遇到過不順,但她活得很真實,就像她演戲一樣,也特色鮮明。
1976年6月29日,馬伊琍出生於上海市虹口區。15歲時,馬伊琍參加上海電視臺的綜藝舞蹈隊,正式自食其力自己賺取學費。1993年,馬伊琍被選中主演電影《劉海粟》,那是她的第一次觸電經歷,收穫800元片酬。
1994年,馬伊琍考入上海戲劇學院94級表演系本科。1996年,馬伊琍與保劍峰、陳龍、高曙光、張雅琳共同出演了電視劇《真空愛情記錄》,講述了一群大學畢業生為了工作和愛情奮鬥的故事。
1998年,馬伊琍畢業於上海戲劇學院,畢業後參演了第一部改編自陝西駐滬作家李春平同名小說的電影《玻璃是透明的》,飾演“小丫子”。同年,其出演了第一部古裝電影《孔乙己》。
2000年,通過出演《黑洞》提升了表演事業。同年,在電視劇《前世今生》中飾演美貌且氣質超凡的秦婉瑩。2001年,出演電視劇《白天睡覺的女人》中的李秀。同年,在電影《西施眼》中飾演施雨,該片在2002年美國夏威夷國際電影節中獲評審團大將及亞洲最佳電影。2002年,因出演電視劇《還珠格格Ⅲ之天上人間》中的紫薇一角而被大眾所熟知。
馬伊琍憑藉於1996年出演的電視劇《真空愛情記錄》而正式出道。其後在2007年出演電視劇《奮鬥》,獲得巨大關注。此後片約不斷,演技受到廣泛認可,屢獲國內影視大獎。2020年12月28日,憑藉《旗袍美探》獲第29屆華鼎獎中國近現代題材電視劇最佳女演員獎。2018年1月1日,憑藉《我的前半生》獲得2017國劇盛典年度實力劇星獎。[7]1月31日,“2017中國慈善名人榜TOP30”揭曉,馬伊琍位居第二十二名。2月,馬伊琍出任電影《金錢世界》中國推廣大使。6月16日,憑《我的前半生》獲第24屆上海電視節白玉蘭獎最佳女主角。6月16日,參加第21屆上海國際電影節開幕式。7月14日,參加綜藝節目《朗讀者》。8月15日,獲得第29屆中國電視金鷹獎觀眾喜愛的女演員獎提名。]9月3日,參演的電影《那些女人》在中國內地上映。9月10日,發行合唱單曲《為你》。9月14日,主演的電影《未擇之路》上映。10月5日,與姚晨共同主演的電影《找到你》上映。12月,憑藉《進京城》獲得第10屆澳門國際電影節最佳女主角獎提名。
2019年4月26日,憑藉《找到你》獲第十屆中國導演協會2018年度表彰大會年度女演員獎。5月10日,參演的電影《進京城》上映,在劇中飾演鳳格格。6月12日,憑藉《找到你》獲第25屆華鼎獎中國電影最佳女主角獎。9月12日,參演的電影《拿摩一等》在中國內地上映。9月22日,主演的電視劇《在遠方》在浙江衛視播出,在劇中飾演路曉鷗。9月25日,發行單曲《相遇的可能》。9月30日,主演的電影《我和我的祖國》在中國內地上映。10月22日,憑藉電影《找到你》獲第32屆中國電影金雞獎最佳女主角提名。12月,參演電影《歐巴,你好帥》。
2020年4月,參演電視劇《在不安的世界安靜地活》。7月17日,憑藉《在遠方》獲第26屆上海電視節白玉蘭獎最佳女主角提名。8月26日,參加的綜藝節目《女人30+》第二季定檔在騰訊影片播出。8月28日,主演的電視劇《旗袍美探》定檔在騰訊影片、北京衛視播出,在劇中飾演蘇雯麗。12月28日,憑藉《旗袍美探》獲第29屆華鼎獎中國近現代題材電視劇最佳女演員獎。