大家好，今天來和大家聊聊黃傘的培養以及如何菌種分離，下面來一起看看吧。母種培養基的製備：母種是指用自行分離或外購的試管菌種經擴大繁殖而成的瓊脂斜面或固體基質斜面菌種。方法：取200克去皮的無芽馬鈴薯，50克闊葉木屑，加1000毫升水煮20分鐘。過濾後，用水補足至1000ml，加入20g瓊脂，在瓊脂完全溶解後加入20g葡萄糖，3磷酸二氫甘油，1.5g硫酸鎂，充分攪拌，然後加熱試管。

分裝試管及滅菌：使用18mm×180mm或20mm×200mm大試管，提前清洗備用。分裝管的適宜介質深度為管長的1/5。分裝完畢後，隨時堵上棉塞（鬆緊度以手持式為準），每10片裝成一捆，用報紙包好，放入行動式高壓蒸汽滅菌罐中滅菌，在121.3℃或0.1076mpa下滅菌30分鐘。取出管子後，冷卻至60℃左右，趁熱製作斜面（斜面長度佔管子總長度的1/2~1/3）。培養基凝固後，用報紙將10根試管斜成束包裝備用。與平菇相比，蛹菌毛菌絲生長緩慢，抗雜質能力弱，易被雜菌侵入，導致雜菌汙染。

接種箱滅菌：先用0.25%的新清潔滅菌或其他消毒藥物擦拭接種箱，放置滅菌試管斜培養基、試管斜菌、酒精棉球、接種鉤、廢瓶、記號筆、酒精燈火柴或打火機、滅菌幹棉塞，將裝有甲醛的燒杯或碗燻蒸進接種箱，並稱取甲醛量。將一半重量的高錳酸鉀放入燒杯或碗中，測量規定量的甲醛（每立方米空間10毫升），倒入燒杯或碗中，立即密封接種箱，用甲醛燻蒸消毒30分鐘以上。

接種操作：接種操作人員剪指甲洗手。最好用0.25%的新鮮清洗液或1%～2%的溶血素浸泡3～5分鐘。將手穿過袖子放入接種箱，然後用酒精棉球擦拭手和手腕，重點放在指尖和手指縫上。點亮酒精燈，左手握住一個傾斜試管和一兩個傾斜培養基，右手握住接種鉤。首先，將接種鉤燒在酒精燈的外焰上。金屬絲部分應為紅色，9絲與手柄結合處應徹底燒傷，金屬絲手柄部分應旋轉均勻燒傷。然後，拔出酒精燈火焰上方的棉塞，用右手小指和無名指夾住棉塞。

菌種分離無菌操作技術：從混合菌群中分離出寄生菌。大黃的分離方法有兩種：組織分離法和孢子分離法。與孢子分離法相比，組織分離法得到的黃傘菌絲生長速度快，抗雜質能力強，直接用於栽培的產量高，子實體品質好。因此，採用組織分離法獲得的菌絲體可直接用於生產。用孢子分離法獲得的菌絲體應通過小型蘑菇生產試驗進行篩選，並用組織分離出效能較好的子實體，固定好優良的生產特性，作為生產菌株進行生產。

組織分離法是一種無性繁殖方法，通過培養食用菌子實體的某些組織，可獲得純細菌。可採用鋸末綜合培養基。（1）蘑菇品種選擇：野生大花蕙蘭果體，選擇外觀完整、無病蟲害、無開放（無孢子）、肉質較厚、相對乾燥的個體；人工栽培大花蕙蘭果體，選擇第一茬、外形美觀、大小適中的優良個體。厚而肥的蘑菇肉，沒有開放的（沒有孢子）和沒有病蟲害的蘑菇種。採摘蘑菇前一天停止噴水使其乾燥。

（2）香菇殺菌：將香菇的基部切掉，放入滅菌接種書9中，用消毒水沖洗數次，取消毒紙擦乾香菇表面水，用75%酒精棉球擦拭香菇表面。（3）塊狀接種：分離人員用酒精棉球仔細消毒蘑菇體，從中間縱向撕開，用消毒手術刀在菌柄與菌蓋的接合處交叉數刀，拿起菌柄上方的一小塊果肉組織，接種於培養基上：蘑菇體撕開後，也可用小消毒鑷在菌柄與菌蓋接合處撕開肉組織，在菌柄接合處接種。也可以用無菌鑷子取出。在整個過程中應注意無菌操作。

（4）培養純化：23-25℃培養2-4天，組織塊上可見淡黃色的絨毛狀菌絲。注意檢查和區分外來細菌的干擾，及時清除汙染菌株和菌絲生長較慢的菌株。為了生產需要，需要一次進行大量的組織分離，選擇生長速度快、無汙染、菌絲稠密、淺黃色、厚的分離材料。分離材料一部分用於蘑菇實驗，另一部分用於細菌儲存。

（5）蘑菇生產試驗：選擇部分組織分離株進行體外擴增培養，並轉移到原栽培種，進行蘑菇試驗，證明高產、子實體品質好的菌株可用於生產。

孢子分離有兩種方法：孢子排出法和多孢子分離法。孢子噴射分離法：先製備數個三角瓶（250-500ml），掛細鐵絲或廢電爐絲製成孢子噴射裝置，殺死98個後備用。選擇生長旺盛、蘑菇形狀好、菌絲開放、有八九個器官的子實體，經火焰滅菌後，用剪刀或手術刀剪下幾小片0.5-1立方厘米的組織，用鐵絲或廢電爐絲鉤住，用薄層培養基（15-20毫升）掛在三角瓶中（圖4-2），置於20℃左右散射光的清潔環境中12-24小時。孢子排出後，用無菌操作取出小的子實體，燒瓶口被燒焦。燒瓶儲存在23～25℃的環境中，孢子萌發為菌絲。一般3-5天后，肉眼可在瓊脂平板上看到散在的菌落。將合適的單菌落移入試管斜面進行培養。當菌絲體充滿時，擴大培養基並進行蘑菇試驗。結果表明，較好的品種可作為生產種子。今天的分享就到這裡了，歡迎大家留言評論。