在法國巴黎舉行的2022年國際乙肝病毒（HBV）科學會議上，研究人員介紹了生物製藥公司（Replicor）研發的一種核酸聚合物（NAP）REP2139最新進展，即識別抗病毒核酸聚合物REP 2139中 Hsp40 伴侶 DNAJB12 的作用機制，並確定其在乙肝表面抗原（HBsAg）分泌中至關重要。
乙肝在研新藥REP2139，DNAJB12是潛在靶點，對HBsAg分泌至關重要
研究人員介紹，乙肝病毒的亞病毒顆粒（SVP）在構建循環中的 HBsAg > 99.99。SVP的形態發生/分泌的分子機制尚不清楚。NAPs，它能夠在不影響乙肝e抗原（HBeAg）或 Dane 顆粒釋放的情況下干擾 SVP 的組裝/分泌，並與干擾素和 TDF 聯合使用時，可以實現 HBsAg 高損失率和功能性治癒。
(A) DNAJB12的Western-blot。在第6天測定HepG2.2.15細胞、shRNA陰性細胞系(mock)或敲除DNAJB12細胞系(KD DNAJB12)中DNAJB12水平。(B)轉染DNAJB12 shRNA慢病毒後6天對HBsAg分泌抑制的影響。
REP 2139的共免疫沉澱/下拉試驗：研究人員進行了 MS/MS 分析數據，發現 DNAJB12 是 REP 2139 的潛在靶點。為了驗證這種相互作用，對生物素化的REP 2139 (REP 2139- b)進行了共免疫沉澱和下拉試驗。用 NP40 裂解液裂解HepG2.2.15細胞，並用50 nM的REP 2139或REP 2139- b孵育過夜。
使用 NAP 生物素化的 REP 2139進行下拉試驗，然後用質譜法鑑定出Hsp40伴侶蛋白DNAJB12，它是一種參與 SVP 形態發生的新蛋白。DNAJB12位於內質網膜，在那裡它決定了新生跨膜蛋白的命運，並導致錯誤摺疊蛋白的降解。DNAJB14是 Hsp40 家族成員，結構與 DNAJB12 相似，可能與 DNAJB12 形成異二聚體。
將REP 2139與DNAJB12 (A) HepG2.2.15細胞相互作用，用蛋白G珠與抗生物素抗體和REP 2139 +/-生物素偶聯培養。(B) HepG2.2.15細胞經M-270鏈黴親和素珠和REP 2139 +/-生物素裂解培養。在這兩個實驗中，DNAJB12都在洗脫液(IP)和剩餘的上清液(S)中被檢測到。
(A) DNAJB12和DNAJB14 shRNA慢病毒的敲除劑量-反應效應。我們還證實，由於DNAJB14與DNAJB12高度相似，這兩個shRNA之間沒有交叉效應。
結果表明，REP2139 靶向 DNAJB12，並阻止 Hsc70/Hsp70的招募，以適當摺疊HBsAg，導致其蛋白酶體的降解。這些結果與在體外存在 REP2139 時細胞內 HBsAg 無積累和 HBsAg 從肝臟清除一致。
DNAJB12是 Hsp40 的伴侶，對乙肝表面抗原的分泌至關重要，並被REP2139靶向。DNAJB12 與 Hsp70 和 HBsAg 共定位與其在 HBsAg 摺疊中的伴侶功能一致。DNAJB14，可被 REP 2139 沉澱，但在 HBsAg 的分泌中不起主要作用。
假設 REP 2139 通過j結構域與 DNAJB12 相互作用，基於j結構域中暴露的α-螺旋的存在和REP 2139的雙親和性。需要做進一步實驗以證實這種相互作用。在 REP 2139 存在或不存在情況下，Hsc70/Hsp70 與 DNAJB12 的相互作用將通過 PLA 和拉下試驗（pull-down）進行評估。