細胞穿透肽（CPP），在乙肝病毒治療性寡核酸傳遞中應用，近日被全球科學家提出並發表在2020年12月21日Pharmaceuticals（藥物化學與藥物科學期刊）。研究人員介紹，單獨使用PNAs或siRNA均表現出潛在抗HBV治療價值，那麼，什麼是CPP，它在抑制乙肝病毒複製方向與以往核苷（酸）類似物機制有何區別？

乙肝在研新藥細胞穿透肽，無PNA動物模型，表現抗HBV活性

目前，RNAi是被全球科學家證明，應用於抗HBV治療有前途的一種方法，當然CPP只是2020年末才被發現。其作用機制是，PNA作為抗病毒藥物的主要困難在於，其在脂質雙層膜上的轉運和在細胞內的分佈，因此科學家才將抗εPNA偶聯到陽離子細胞穿透肽（CPP）。在鴨原代肝細胞（PDH）感染DHBV後，研究人員觀察了抗εPNA與多精氨酸（Arg）7或核定位訊號（NLS）CPP偶聯的抗病毒作用。

單獨使用細胞穿透肽（CPP）的抗病毒活性

結果表明，多聚精氨酸（PNA）具有很強的抑制作用。因此，研究人員繼續了CPP單獨使用後，是否同樣具有潛在抗慢性乙肝價值。已有報道了CPPs的生物活性，其中包括抗病毒活性。另外，CPPs對單純皰疹病毒（HSV）和HIV等包膜病毒的抗病毒活性研究較多。事實上，全球真正研究CPPs抑制HBV複製能力的研究專案，是很少或還沒有的。

因此，本研究人員為找到一種有效抗HBV方法，評估了一些分子，比如PNA單獨使用或與CPPs結合使用。讓人驚訝的是，結果發現，其中一些CPP在沒有PNA的情況下，表現出了抗HBV活性。研究人員進一步使用了（D-Arg）8肽治療DHBV感染的PDH或DHBV感染的雛鴨，在鴨子乙肝病毒感染模型中。結果表明，（D-Arg）8的這種抗病毒活性可能會影響CPP-PNA結合物的序列特異性。

還使用相同的DHBV感染模型，在穩定轉染DHBV的雞肝癌細胞（LMH-D2）和PDH培養物中研究了脂質修飾的CPPs肽（如癸烷醯基-（D-Arg）8）對肝病毒複製的抑制作用。研究結果表明，使用不同濃度的癸醯-（D-Arg）8處理這些細胞後，病毒複製能力顯著下降，且呈劑量依賴性。事實上，癸醯基-（D-Arg）8可以抑制病毒複製的後期階段。

更重要的是，這種抑制作用要比用（D-Arg）8獲得的抑制作用更大，這說明（D-Arg）8所顯示的抗病毒效果可以透過修飾這種CPP的兩親分子來改善。有趣的是，這些研究結果有望推廣到人類病毒，因為穩定的HBV轉染細胞系HepG2.2.15的治療，導致了HBV分泌的劑量依賴性抑制（觀點來自：Pharmaceuticals）。在另一項研究中，幾種含有精氨酸7的人工重組肽被用於治療HepG2.2.15細胞。

研究結果表明，這種CPP能有效地進入HepG2.2.15，阻斷乙肝病毒核衣殼組裝，抑制HBV的釋放。目前，許多其他寡核苷酸的非病毒船體系統被使用在這個方向。科學家為了提高其細胞內攝取，寡核苷酸還可以與糖、脂質、聚合物、適體等結合。所以，這些寡核苷酸偶連物的治療潛力在增加。以上就是，CPP單獨使用後，未來可能作為潛在的抗HBV藥物。

什麼是結合糖寡核苷酸？

根據以往文獻記載，寡核苷酸可以和幾種糖共價結合，比如半乳糖或乳糖。結果表明，這些寡核苷酸在與碳水化合物的偶聯，增強了它們進入肝細胞的能力以及穩定性。另外，在肝細胞膜上，研究人員還注意到，唾液酸糖蛋白受體（ASGP-R）是第一個被定義的哺乳動物凝集素。它們透過受體介導的內吞機制，在肝細胞攝取結構中，含有半乳糖末端水化合物的幾種生物分子中，發揮著重要作用。

所以，負責發表這項結論的研究人員認為，碳水化合物siRNA結合物在體外、肝癌細胞系和體內小鼠模型中，都表現出強的基因沉默水平。研究人員還評估了糖修飾的CPP-PNA結合物，在HepaRG人肝癌細胞系中的抗HBV活性，結果表明，抗S-PNA結合乳糖治療HBV感染的HepaRG細胞可增加其攝取量並減少HBsAg釋放量。