你是否遇到新方向的實驗課題無從下手？相信每位同學都曾有過相關的經歷，細胞君初入重組病毒同樣迷茫、無所適從，多希望有個帖子告訴我這個實驗怎麼做、實驗方法如何選擇。今天好訊息就來了，所謂術業有專攻，聞道有先後，專注重組病毒慢病毒（Lentivirus）、腺病毒(Adenovirus)和腺相關病毒(adeno-associated virus，AAV)製備和應用的細胞君就重組病毒如何選擇和初入重組病毒的同學們聊聊，分享自己的經驗。

首先要搞清楚是採用病毒還是質粒？那就要清楚質粒在體外細胞應用上的缺陷：

1、瞬時轉染。轉染結束後一般檢測時間節點為48~72h。

2、目的細胞限制。如293T，Hela和HT1080都是高轉染效率的細胞，高效率才能幫助我們去檢測想要的結果。難以質粒轉染的細胞如EMT6細胞，低轉染效率檢測後不能說明問題。

3、轉染試劑毒性。脂質型(liposome)或聚乙烯亞胺（Polyethylenimine, PEI）類轉染試劑的毒性相對於磷酸鈣法轉染已經得到極大降低，但毒性依然存在。

所以考慮到上述質粒缺點不影響且符合實驗目的，細胞君首推廉價、操作簡單和週期短的質粒。

劃重點：為節省重組病毒製備的高成本及驗證載體表達框或驗證靶點效率等，可以先進行在如工具細胞293T的轉染驗證！陽性對照和陰性對照一定要帶上！！

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接下來我們進行一些簡單的問答就能夠幫助選擇適合實驗的重組病毒型別。

首先，細胞實驗OR動物實驗？

細胞實驗：構建穩轉細胞系？

是請直接選擇重組慢病毒。慢病毒相對於其他病毒的優勢包括：目的基因可整合至宿主細胞基因組從而長時間穩定表達外源基因、感染多種細胞型別和製備週期短、製備方法簡單和成本低。但是慢病毒載體克隆容量最多4kb，所以在構建前一定要考慮目的基因的大小及啟動子、抗性基因或標記基因等。

Tip：慢病毒感染非唯一構建穩轉細胞系途徑，質粒轉染亦可實現，前提是高轉染效率。

否請選擇腺病毒。腺病毒的優勢包括: 表達峰度非常高、達到8kb的克隆容量及腺病毒可在提供E1A的293細胞中複製。但常用人類腺病毒5型不能用來懸浮細胞轉基因，其中目的細胞表面柯薩奇/腺病毒受體即CAR（Coxsackie/adenovirus receptor）的存在是腺病毒感染的必要環節。

Tip：考慮AAV感染的組織特異性強烈不推薦AAV應用細胞實驗。

動物實驗？果斷選擇AAV。其優勢包括：AAV病毒粒子體積小，易於擴散；特異性強：多種血清型針對不同的組織；表達時間長：在分裂不旺盛的神經元細胞中可持續表達數月；免疫原性低。但AAV載體允許克隆的容量只有2.8kb。

最後附上更多參考資訊：同學們可根據實驗目的和實驗週期合理選擇!

下期將為同學們分享穩轉細胞系構建經驗！

>>>>>初次發稿，不足之處定多多改進，只為更好分享自己的經驗。