透析胎牛血清也是用於細胞培養,但同時,又有自己的一些特殊應用。本文為您分析透析胎牛血清的三大用途。
一、摻入研究
例如:有人研究呼吸道合胞病毒的宿主特異性:即為什麼它只感染呼吸道上皮細胞,而不感染其他細胞。
他們將該病毒的F蛋白(融合蛋白)序列克隆入質粒內,並轉染293T細胞。轉染後第20小時,細胞先在不含蛋氨酸和半胱氨酸的DMEM+透析胎牛血清中培養了45分鐘(讓細胞處於飢餓狀態,因培養基中缺少氨基酸),再在同樣上述培養基中培養,但添加了35S標記的蛋氨酸和半胱氨酸。
培養4小時後進行分析。即裂解細胞後,用抗F蛋白的抗體捕獲F蛋白、跑膠並進行放射自顯影,分析F蛋白的表達情況。發現F蛋白的表達確實增加了,但突變後的F蛋白表達卻無任何變化。結果證實,野生型的F蛋白確實參與病毒對宿主細胞的侵襲。
值得指出的是,用35S標記的蛋氨酸和半胱氨酸用來標記細胞內的蛋白,結合免疫沉澱用於觀察在某一過程中發生的某一蛋白的變化,從而發現該蛋白所扮演的角色,的確是一個普遍有效的方法(在研究訊號分子磷酸化的方面,則需要使用32P標記的磷酸鹽)。
在這其中,透析胎牛血清的使用必不可少,即給細胞創造一個無外源氨基酸干擾的環境。
二、細胞水平的藥物篩選
例如:有人要從化合物庫中篩選S1P4受體的拮抗劑,以抑制流感病毒帶來的免疫啟用導致的肺損傷。他採用報告基因進行監測。為了避免細胞培養環境中存在的小分子的干擾,他也需要用10%的透析胎牛血清加McCoy's 5A培養基來培養細胞。
類似在藥物研發過程中,採用特定啟動子操縱的熒光素酶報告基因,基於細胞平臺的高通量藥物篩選,也都需要無外源小分子的培養體系,因而也要用透析胎牛血清。
三、細胞克隆的篩選
包括雜交瘤細胞和CHO細胞等,由於在進行細胞篩選時,需要無外源小分子如次黃嘌呤和胸腺嘧啶等的干擾,因此也需要用到透析胎牛血清。