真空採血管品種多樣，如何挑選合適的採血管？

滅活型和非滅活型病毒儲存液如何挑選？

面對粘稠的痰液樣本，如何才能有效提取核酸？

下面，開課啦~

2019年底新型冠狀病毒肺炎在中國肆虐，因其高度傳染性，國家對此次疫情極度重視，組織全國力量防控疫情。科研界在短時間內即分離出新型冠狀病毒毒株，破解其核酸序列。新冠核酸檢測技術開始普及，進入大眾視野，開啟了病原核酸檢測的時代。

組織樣本

塊狀組織樣本短時間內無法充分裂解，一般需要進行樣本預處理。取新鮮組織樣本用生理鹽水清洗2次，再將清洗後的組織塊用玻璃砂研磨或組織研磨機制成勻漿，加入生理鹽水或PBS進行劇烈振盪混勻、離心，取上清進行核酸提取。

血液樣本

採用含有抗凝劑的真空採血管儲存即可。但採血管中的抗凝劑種類多樣，抗凝劑的種類也會直接影響後續檢測結果，面對這麼多的採血管如何進行選擇？小編查閱專業書籍，建議使用EDTA或枸櫞酸鈉抗凝管，不建議使用肝素抗凝管（因肝素在後面的核酸提取過程中很難去除，且肝素對PCR反應有很強的抑制作用，因此不建議使用肝素抗凝管）。採集完血液，顛倒混勻備用。

血清或血漿樣本

全血不加抗凝劑分離的上清是血清，加入抗凝劑分離的上清是血漿。取全血後，靜止1-2 h，置於離心機3000 rpm離心15 min即可獲得血清或血漿。

拭子樣本

拭子樣本一般儲存在病毒儲存管中。病毒儲存管根據儲存液成分不同又分為滅活型病毒儲存管和非滅活型病毒儲存管。非滅活型病毒儲存液，主要是以運送培養基為基礎改良的病毒維持液，可以保留病毒的活性，用於病毒毒株的分離鑑定和病毒培養居多。滅活型病毒儲存液是以核酸提取裂解液為基礎改良的儲存液，可以裂解滅活病毒同時保護病毒核酸不被降解，通常用於病原核酸檢測。取樣拭子直接接觸取樣部位，拭子的材質也會對後續檢測結果產生影響，其中絨拭子因其良好的吸水性和更有利於釋放病毒的特性得到廣泛應用。取樣後將拭子在儲存液中充分振盪混勻，取上清進行核酸提取。

痰液樣本

痰液中含有大量黏蛋白和雜質，比較粘稠，直接進行核酸提取效果不佳，因此要進行痰液預處理。用NaOH或變性劑液化，然後離心取沉澱進行核酸提取。

小結

【1】李金明，實時熒光PCR技術【M】.北京：科學出版社，2016年，66-69.