核心：最關鍵的就是減少細胞碎片和單細胞懸液的製備！

1、原理：細胞在有絲分裂的過程中DNA會複製擴增加倍，為原來的1-2倍。PI染色DNA後，透過檢測DNA的量來判斷細胞週期狀態。G1期細胞主要進行RNA和蛋白的合成， DNA數目為n。S期DNA開始複製，直到複製結束進入M期，DNA數目為n-2n。G2期主要是RNA和蛋白的合成,為M期做準備 DNA數目為2n 。M期細胞分裂的過程，直到M結束細胞一分為二，DNA數目也是2n。從DNA的數目上，我們可以將細胞週期分為G0/G1期，S期，G2/M期.

2、細胞消化要理想，資料顯示最好消化時加EDTA，充分使細胞消化成單個細胞，因為細胞成團會被流式細胞儀誤檢測成多倍體，從而使結果中G2/M期細胞比例增加。

3．細胞消化後不可吹打過度，減少細胞破碎；以後的吹打也要注意，尤其是固定後的細胞容易破碎。

3、細胞用PBS洗滌離心，轉速不超過1000r/min，有文獻用800r/min；可考慮在此過程中用300目的尼龍網過濾一遍細胞（有人主張用鋼網，以 減少細胞與尼龍網粘連的損失，本人覺得鋼網易損傷細胞，DNA外溢也會造成細胞粘連，所以在細胞數足夠的情況下，首選尼龍網）。

4、離心後的固定，標準做法是將細胞懸液加入預冷70％酒精，而不是向細胞中加酒精，這樣是為了減少細胞聚集，這一點很重要，很多人都忽視了！

5、一般選擇4℃固定過夜，固定時間不要超過24小時。

6、加染液前的洗滌仍要注意離心轉速的問題。

7、關於PI染液的組成及配方，應主要以文獻為主，PI（作用為DNA染色劑）的濃度從0.5μg/ml,20μg/ml，到50μg/ml都見報道。RNAs酶（由於PI也可染RNA，用RNA酶降解RNA，從而PI染色能精準的反應DNA的含量。）一般濃度為50μg/ml，配方中的Triton-X-100（曲拉通）主要是通透細胞膜使PI能進入細胞核。

8、檢測時細胞要達到1～2×10^6個細胞（實際檢測是1-5萬個細胞左右），為了既保持初始條件相同，又可收集到足夠的細胞，應選用多孔培養板，在收集細胞時，濃度大、抑制強的組可多收集些孔，以保證檢測的細胞數量。如果細胞數量太低，技師就會選擇高速流（一般的檢測用低速流，誤差小），檢測的質量就會大大下降，資料的說服力就下降了！

9、週期結果圖中各相峰高聳，各期分開清楚顯示較好的結果。

養細胞要用好血清！