假期太快結束，又到了復甦細胞開始實驗的環節了 ，以下是整理的一些復甦細胞的注意事項：

1. 細胞儲存在液氮中，溫度達-196℃，理論上儲存時間是無限的。只要一直在液氮，凍存沒有問題，那麼復甦也不會出現很大的問題，不存在有效期限，而且可能發生的是，細胞儲存的時間越久，可能代次越靠前哦，細胞凍存及復甦的基本原則是慢凍快融，復甦一定越快越好，實驗證明這樣可以最大限度的儲存細胞活力。

2. 取細胞時應做好防護措施，帶好防凍手套，護目鏡。細胞凍存管可能漏入液氮，解凍時凍存管中的氣溫急劇上升，可導致爆炸。

4. 提前預定超淨臺，減少復甦後插在冰盒裡等待的時間。復甦後若需要長時間（>1h）等待，建議往離心管加15ml以上培養基搖勻以稀釋DMSO給細胞帶來的毒性作用。對於不離心直接加入培養基培養的方法，培養基的加入量是個需要考慮的問題。主要涉及DMSO的濃度，一般DMSO含量為5%的細胞，在7.5ml的完全培養基裡不受影響，細胞可正常生長（這招很管用哦）。

5. 關於細胞溶解後，是否需要離心的問題，需要根據特定的細胞情況而定。主要有兩種方式。一種是解凍後的細胞懸液直接吹打均勻後分裝到培養瓶中進行培養，第二天換液（後貼壁後即換液）。因為離心的目的是兩個，去除DMSO，去除死細胞，這個是標準流程。但對一般人來說，把握不好離心轉速和時間，轉的不夠活細胞沉底的少，細胞就全被扔掉了，轉過了活細胞會受壓過大，死亡。此外在操作過程中容易汙染。另一種是須離心後，將凍存液倒乾淨，且一定要倒乾淨。懸浮細胞和貼壁比較慢的細胞一定要離心，比如NCI-H716,和LNCAP等特殊培養方式的細胞。

6. 有些細胞復甦後一星期才有起色，切忌要有耐心，不要換液，耐心等待，兩週後再做決定。不要復甦三四天後，細胞沒有任何動靜，認為失敗，倒掉所有細胞。MLO-Y4就有這種毛病，技術復甦後各種花式優待它就是不長，然後大家都不想理它了，放了一週多拿出來，竟然長滿了。