10月8日，發表於Clinical Cancer Research雜誌上的一項前瞻性、國際多中心的臨床研究證明，在III期結直腸癌患者術後採用Signatera (華見微®) 技術連續監測ctDNA的水平，可作為強有力的預後預測和輔助化療療效評估的工具，ctDNA水平的變化速率可以作為區分MRD陽性患者預後有效指標。

該技術在ctDNA連續監測的靈敏度達91.4%，特異性達93.3%，陽性預測值（PPV）達97%，全面碾壓傳統的腫標癌胚抗原（CEA）和ddPCR等監測方法，為腫瘤MRD檢測的效能評估和證據質量設定了新標準，也為腫瘤術後復發和療效檢測奠定了基礎1。

華見微®以其高靈敏度和高特異性受到業內廣泛認可。用該方法判斷術後ctDNA（即MRD）的陰陽性狀態，是判斷I-III期結直腸癌預後的獨立預測因素2，並被美國國家綜合癌症網路（NCCN）結腸癌指南所引用。

研究團隊透過對160名III期結直腸癌（CRC）患者中的ctDNA進行連續監測（隨訪期3年），驗證了術後（2-4周）ctDNA陽性和輔助治療（ACT）後ctDNA陽性與復發風險的高度關聯（復發風險較ctDNA陰性患者分別7倍和50.76倍）。

更重要的是，該研究團隊指出連續ctDNA監測對於臨床預後有更多獲益，超越MRD的檢測，其中包括來評估輔助化療的療效、早期復發檢測、ctDNA增長率以及其與複發性疾病臨床行為的相關性3。

該文章第一作者，丹麥奧胡斯大學醫院分子醫學系的Tenna Vesterman Henriksen博士指出：“該項研究是關於III期結直腸癌ctDNA檢測的最全面的研究之一，並擴充套件了之前在較小佇列中進行的研究。該文重點介紹了幾種ctDNA的臨床應用，其中一些應用目前正在IMPROVE-IT， DYNAMIC-III，VEGA，TRACC，和 IMPROVE-IT2等隨機試驗中進行研究3。”

研究背景

III期CRC患者有很高的復發風險，歐洲臨床腫瘤學會（ESMO）於2020頒佈的臨床診療指南中推薦III期CRC患者使用手術+術後輔助化療策略4。目前臨床上缺少準確監測患者對輔助化療療效及耐受的生物標誌物。多項研究指出，術後MRD的狀態可以用於判斷預後和療效評估5。本研究主要臨床終點為無復發生存期（RFS），次要終點為複發率及總體生存期（OS）等指標3。

試驗設計與方法

-該項前瞻性、國際多中心研究在丹麥和西班牙共招募III期CRC患者168例，最終入組患者160名（共166份腫瘤組織樣本及1,204份血液標本）。其中納入患者均符合治療計劃，且術前胸腔、腹腔和骨腔CT結果均無轉移。該研究採用標準的ACT治療策略（氟嘧啶+/-奧沙利鉑治療6個月），並進行了長達3年的臨床隨訪期監測（圖1）。

-技術方法：該研究採用Signatera MRD檢測技術，先對腫瘤組織進行全外顯子組測序（WES），從中挑選16個主克隆突變（truncal SNVs）進行個性化panel定製。在監測節點時，對患者的個性化位點進行超高深度ctDNA測序。其中本文ctDNA的增長率計算，是根據ctDNA水平對每位患者進行log-linear對數線性迴歸分析，採用迴歸線斜率計算得出。

圖1.試驗設計

關鍵結果

1.術後ctDNA陽性患者的複發率遠高於陰性患者

在平均3年的隨訪中，160例患者中總體複發率為25%（40/160）。共有140例患者被納入生存分析，其中14%（20/140）的患者術後ctDNA呈陽性。

這些患者的複發率為80%（14/20），而ctDNA-MRD陰性患者複發率僅為18%（22/120）（圖2）。陽性患者的復發風險是陰性患者的7倍。ctDNA在剔除其他高危因素後（年齡≥70歲、四期、腫瘤分化、CEA），依然是很強的預後預測標誌物（HR=30.97）。

圖2.術後ctDNA監測與RFS及複發率的關係

2.經輔助化療後依然保持ctDNA陽性的患者，其復發風險是陰性患者的50.76倍

在20位術後陽性的患者中，90%（n=18）的患者接受術後輔助化療。多因分析中，傳統的年齡≥70歲及ACT治療後ctDNA的狀態依然可以作為無復發生存期（RFS）的預測指標，但ctDNA的狀態（陰陽性）是最重要的影響因素（HR= 94.25）。

3.ctDNA監測比傳統的影像學平均提前10個月發現腫瘤復發。（圖3）

圖3.ctDNA-MRD陽性患者中，ctDNA相較CT影像學平均提前發現復發的時間。

4.ctDNA的變化速率能夠為ctDNA-MRD陽性患者進行預後分層（圖4）

可將患者分為快速增長型（fast，47%，8/17，平均斜率±標準方差[SD]為2.37±0.5，每月增長137%）和慢速增長型（slow，53%，9/17，平均斜率±SD為1.27±0.13，每月增長27%）。臨床復發及預後。

其中連續檢測ctDNA增長速度與較差的總生存期（OS）相關聯（HR=3, 95% CI 1.1-7, p=0.039）。快速增長型患者的OS會顯著短於慢速增長型患者（3年OS為37.5% vs. 100%）；而慢速增長型患者和無復發患者的預後基本無差別（p=0.18）。

圖4.復發患者的ctDNA水平變化

5.持續監測ctDNA清除狀態用於判斷預後

ctDNA-MRD陽性患者在ACT治療期間和之後的持續ctDNA清除後預後良好（n=3，3年RFS為100%），而ACT治療期間短暫ctDNA清除的預後較差（n=10，3年RFS為0%）（圖5）。

圖5.術後輔助化療ACT前、期間、治療後及復發時或3年隨訪結束時的ctDNA水平

關於華見微

Signatera® MRD檢測產品/華見微已被用於包括非小細胞肺癌，膀胱癌，乳腺癌，結直腸癌等多個癌種的眾多臨床研究，最多可比傳統影像學提前2年發現腫瘤復發。

該產品可以高效輔助創新性臨床試驗設計，使臨床研究能更早地做出更合理的決策。

參考文獻：

1. Loupakis F, Sharma S, Derouazi M, et al. Detection of molecular residual disease using personalized circulating tumor DNA assay in patients with colorectal cancer undergoing resection of metastases[J]. JCO Precision Oncology, 2021, 5: 1166-1177.

2. Reinert T, Henriksen T V, Christensen E, et al. Analysis of plasma cell-free DNA by ultradeep sequencing in patients with stages I to III colorectal cancer[J]. JAMA oncology, 2019, 5(8): 1124-1131.

3. Henriksen TV, Tarazona N, Frydendahl A, et al. Circulating tumor DNA in stage III colorectal cancer, beyond minimal residual disease detection, towards assessment of adjuvant therapy efficacy and clinical behavior of recurrences[J]. Clin Cancer Res. 2021, clincanres.2404.2021.

4. Argilés G, Tabernero J, Labianca R, et al. Localised colon cancer: ESMO Clinical Practice Guidelines for diagnosis, treatment and follow-up[J]. Ann Oncol. 2020;31(10):1291-1305.

5. Gong J, Hendifar A, Gangi A, et al. Clinical applications of minimal residual disease assessments by tumor-informed and tumor-uninformed circulating tumor DNA in colorectal cancer[J]. Cancers (Basel). 2021;13(18):4547.