實時熒光PCR（Real-time PCR）是一種檢測DNA擴增的技術，其基本原理是利用熒光探針（例如TaqMan探針、SYBR Green探針等）與PCR反應體系中的DNA結合，產生熒光信號，通過檢測熒光信號的強度和變化，可以確定PCR反應過程中DNA擴增的程度和數量。實時熒光PCR的基本過程如下：

DNA模板準備：從樣品中提取DNA，並按照需要的擴增區域設計好引物和探針。

PCR反應：將DNA模板、引物、探針和PCR反應液混合，放入PCR儀中，進行PCR反應。PCR反應過程中，DNA模板會被引物特異性擴增，同時熒光探針會與PCR產物結合，併產生熒光信號。

熒光信號檢測：在PCR反應過程中，PCR儀會週期性地檢測PCR反應管中的熒光信號強度，並將熒光信號數據實時傳輸到計算機上。

數據分析：通過分析熒光信號的強度和變化，可以確定PCR反應過程中DNA擴增的程度和數量。一般情況下，熒光信號強度與PCR產物數量成正比，因此可以通過測量熒光信號的強度，計算出PCR產物的數量。總之，實時熒光PCR技術可以實現在PCR反應過程中實時監測DNA擴增的數量和程度，具有操作簡便、高靈敏度、高特異性等優點，被廣泛應用於醫學、生物學、環境科學等領域的DNA分析和檢測中。

熒光定量PCR儀原理：

將標記有熒光素的Taqman探針與模板DNA混合後，完成高溫變性，低溫復性，適溫延伸的熱循環，並遵守聚合酶鏈反應規律，與模板DNA互補配對的Taqman探針被切斷，熒光素游離於反應體系中，在特定光激發下發出熒光，隨著循環次數的增加，被擴增的目的基因片段呈指數規律增長，通過實時檢測與之對應的隨擴增而變化熒光信號強度，求得Ct值，同時利用數個已知模板濃度的標準品作對照，即可得出待測標本目的基因的拷貝數。

熒光定量pcr步驟：

1、配反應體系：引物、模板、buffer，dNTPs,酶，Mg2+,(如果是熒光定量PCR，則還有染料或探針）

2、設置熱循環參數，94、55、72等

3、上機實驗，如果是熒光定量PCR則實時可以觀察實驗過程。