主要是在卡口材質和對焦模塊進行了升級

三代較二代的區別有

1、與二代相比由過去的塑料卡口升級為金屬卡口，使鏡頭的安全性得到保證，也使鏡頭耐用性得到大幅提高。

2、在鏡頭結構上，三代採用5組6片的光學結構，濾鏡直徑由52mm改為49mm，濾鏡直徑縮小，光圈葉片由5片升級至7片，使得鏡頭成像質量提高，減少部分玄光，能夠呈現出更為柔美的虛化背景。

3、最近對焦距離減小由原來的0。35提昇至0.21倍，比上代具備更好的微距拍攝效果。

4、加入了全新的STM馬達，實現了更加寧靜的對焦聲音和更快的對焦速度，具有無極對焦功能，在視頻拍攝中實現了安靜平滑的對焦效果，另外還具備全時手動對焦功能。

5、三代新鏡頭加入了超級光譜鍍膜技術，能夠大幅提昇鏡頭的抗眩光、鬼影能力，相比二代在夜景防玄光方面有了更好的效果。

佳能16-35 F2.8三代與二代的區別是：

佳能16-35 F2.8二代的USM鏡頭使用2片UD鏡片，1片研磨非球面鏡片，2片非球面鏡片，鏡頭結構：12組16片，光圈葉片：7片（圓形光圈），最近對焦距離約0.28米，最大放大倍率約0.22倍，濾鏡直徑82mm，最大直徑及長度約Φ88.5×111.6mm，重量約640克。

佳能16-35 F2.8三代的USM鏡頭使用2片UD鏡片，1片研磨非球面鏡片，2片非球面鏡片，SWC亞波長結構鍍膜，ASC空氣球形鍍膜，鏡頭結構：11組16片，光圈葉片：9片（圓形光圈），最近對焦距離約0.28米，最大放大倍率約0.25倍，濾鏡直徑82mm，最大直徑及長度約Φ88.5×127.5mm，重量約790克。

佳能16-35 F2.8三代是二代的升級版，鏡面更清晰和聚光，放大倍、直徑長度和重量均有提昇，有助於拍照呈現出剛好的效果。