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1 # 用戶7322213355864
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2 # 摘星子2022
磁珠法核酸提取一般可以分為四步:裂解——結合——洗滌——洗脫 1、裂解 核酸必須從細胞或其他生物物質中釋放出來,細胞裂解可通過機械作用、化學作用、酶作用等方法實現。
其中,酶作用主要是通過加入溶菌酶或蛋白酶(蛋白酶K、植物蛋白酶或鏈黴蛋白酶)以使細胞破裂,核酸釋放。
蛋白酶還能降解與核酸結合的蛋白質,促進核酸的分離。
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3 # 名字屹川屹晨
DNA的提取方法
一.酚抽提法：先用蛋酶K、SDS破碎細胞，消化蛋白，然後用酚和酚-氯DNA大小為100-150kb
二.甲酰胺解聚法：破碎細胞同上，然後用高濃度甲酰胺解聚蛋白質與DNA的結合，再透析獲得DNA可得DNA200kb左右。
三.玻璃棒纏繞法：用鹽酸胍裂解細胞，將裂解物鋪於乙醇上，然後用帶鉤或U型玻璃棒在界面輕攪，DNA沉澱液繞於玻棒。生成DNA約80kb。
四.異丙醇沉澱法：基本同1法，僅用二倍容積異丙醇替代乙醇，可去除小分子RNA（在異丙醇中可溶狀態）
五.表面活性劑快速製備法：用Triton X-100A或NP40表面活性劑破碎細胞，然後用蛋白酶K或酚去除蛋白，乙醇沉澱或透析。
六.加熱法快速製備：加熱96℃-100℃，五分鐘，然後離心後取上清，可用於PCR反應。
七.鹼變性快速製備：先用NaOH作用20分鐘，再加HCI中和，離心後取上清，含少量DNA。
1. 細胞裂解與細胞裂解緩衝液裂解細胞膜
2. 脂質被洗滌劑和表面活性劑分解
3. 通過添加蛋白酶消化蛋白質
4. 通過添加 RNase 消化 RNA
5. 通過加入濃鹽然後離心分離細胞碎片、消化蛋白質、脂質和 RNA
6. 用冰冷的乙醇或異丙醇乙醇沉澱 DNA。 醋酸鈉的離子強度可用於改善沉澱。 沉澱的 DNA 在最終溶液中呈線狀。