把已冷卻好的茶糖水放入已消過毒的培養容器內，再將紅茶菌及菌液一同倒入茶糖水中進行培養。容器口要用3－4層紗布蓋嚴並用線繩紮緊，這樣既利於紅茶菌的生長還可以防塵防蠅。

最後把培養容器放到清潔、背光、溫暖的地方進行發酵培養。

方法如下：

準備好含有紅茶菌的基礎茶湯，比如釀造好的甜茶水或者已經發酵好的紅茶飲料。

將基礎茶湯倒入一個寬口玻璃容器中，最好是淺而寬的容器，這樣可以讓紅茶菌菌膜更容易生長。

將新鮮的紅茶菌菌膜放入容器中，並將其懸掛在茶湯表面。如果沒有菌膜，可以購買或從其他人那裡獲取。

將容器蓋上紗布或紙巾，放置在通風良好、避光、溫度適宜（最好保持在20-30度）的地方，讓紅茶菌自然發酵和繁殖。注意不要讓其他微生物進入容器。

大約每7-10天左右，就可以收獲新的紅茶菌菌膜了。將其取出，用於制作飲料或繼續繁殖。